人教高中生物热点05 基因工程的典型题分析（解析版）.docx

热点05 基因工程的典型题分析
知识点一： 限制酶的选择原则
(1)不破坏目的基因原则：如图甲中可选择PstⅠ，而不选择SmaⅠ。
(2)保留标记基因原则：质粒作为载体必须具备标记基因，所以所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构，如图乙中不选择SmaⅠ。
(3)确保出现相同黏性末端原则：通常选择与切割目的基因相同的限制酶，如图甲中PstⅠ；为避免目的基因和质粒自身环化和随意连接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒，如图甲也可选择PstⅠ和EcoRⅠ两种限制酶。
知识点二．筛选合适的目的基因
（1）较为有效的方法：从相关的已知结构和功能清晰的基因中进行筛选。
（2）实例：在培育转基因抗虫棉之前，科学家不仅掌握了Bt基因的序列信息，也对Bt基因的表达产物——Bt抗虫蛋白有了较为深入地了解。
(3)认识基因结构和功能的技术方法：DNA测序技术、遗传序列数据库、序列比对工具。
知识点三、PCR技术与生物体内DNA复制的比较
比较项目
PCR技术
DNA复制
区别
解旋方式
DNA在高温作用下变性解旋
解旋酶催化
场所
细胞外（在PCR扩增仪内）
细胞内（主要在细胞核内）
酶
耐高温的DNA聚合酶（Taq聚合酶）
DNA解旋酶、普通的DNA聚合酶等
温度条件
需控制温度，在较高温度下进行
细胞内温和条件
合成的对象
DN***段或基因
DNA分子
联系
①模板：均需要脱氧核苷酸链作为模板进行物质合成
②原料：均为四种脱氧核苷酸
③酶：均需要DNA聚合酶进行催化
④引物：均需要引物，使DNA聚合酶从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸
知识点四、将目的基因导入受体细胞
受体细胞
方法
说明
特点
植物细胞
农杆菌转化法
将目的基因插入农杆菌Ti质粒的T­DNA上→转入农杆菌→用农杆菌侵染植物细胞→将目的基因整合到植物细胞染色体的DNA上→目的基因表达
经济、有效，适用于双子叶植物和裸子植物，尤其适用于双子叶植物
花粉管通道法
在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头→滴加DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞→目的基因表达
简便、经济，我国科学家独创的一种方法
动物细胞
显微注射
技术
将含有目的基因的表达载体提纯→取卵（受精卵）→显微注射→注射了目的基因的受精卵，经胚胎早期培养后，移植到雌性动物的输卵管或子宫内→获得具有新性状的动物
将目的基因导入动物细胞最为有效的方法
微生物细胞
Ca2＋处理法（感受态细胞法）
用Ca2＋处理微生物细胞→感受态细胞→将基因表达载体与感受态细胞混合→在一定温度下促进感受态细胞吸收DNA分子
简便、经济、有效
基因工程的知识点常以大题的形式考察，对于限制酶的选择以及目的基因导入细胞的方式则是常见的考点，学生要能准确找到酶切位点，对于目的基因要能够清晰的认知，并且能准确确定受体细胞的类型。
（建议用时：30分钟）
一、单选题
1、下图为真核生物核基因结构模式图，下列叙述正确的是（       ）
A．启动子编码起始密码子
B．cDNA文库和基因组文库的基因中均含有内含子
C．在转录完成后，RNA聚合酶从c~d区段脱落下来
D．细胞内DNA复制时，只复制编码区，不复制非编码区
【答案】C
【解析】
【分析】
真核细胞的基因由编码区和非编码区两部分组成，其中编码区包括能够编码蛋白质的序列（外显子）和一般不能够编码蛋白质的序列（内含子），在真核细胞基因表达时，首先由DNA转录出前驱mRNA，然后经过裁接才能形成成熟的mRNA。
【详解】
A、mRNA上起始密码子的序列应由基因的编码区编码，而启动子位于编码区上游的非编码区，所以启动子不编码起始密码子，A错误；
B、cDNA文库中不含有内含子，B错误；
C、c~d区为终止子区域，终止子可终止转录过程，因此在转录完成后，RNA聚合酶从c~d区段脱落下来，C正确；
D、DNA分子复制时形成的子代DNA与亲代DNA相同，不具有选择性，因此细胞内DNA复制时，即复制编码区，也复制非编码区，D错误。
故选C。
2、科学家利用PCR技术扩增人乳头瘤病毒HPV-16L1蛋白基因，构建了含HPV-16L蛋白基因的表达载体pBI-L1，经根瘤农杆菌介导转化，获得了转基因烟草植株。该技术利用转基因烟草作为生物反应器，生产出了纯度较高的HPV-16L1蛋白。下列说法错误的是（       ）
A．构建表达载体pBI-L1时至少需要两种限制酶以防止目的基因与质粒反向连接
B．采用根瘤农杆菌介导转化时可对烟草组织进行切割，以便于农杆菌入侵植物组织
C．为促进转基